摘要：紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中各組分在；流動相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定相（濾紙纖維常能吸20%左右的水），有機溶劑如乙醇等為流動相，色素提取液為層析試樣。把試樣點在濾紙的濾液細線位置上，當流動相溶劑在濾紙的毛細管的作用下，連續(xù)不斷地沿著濾紙前進通過濾液細線時，試樣中各組份便隨著流動相溶劑向前移動，并在流動相和固定相溶劑之間連續(xù)一次有一次的分配。結(jié)果分配比比較大的物質(zhì)移動速度較快，移動距離較遠；分配比較小的物質(zhì)移動較慢，移動距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上，從而達到分離。  

關(guān)鍵詞：紙層析，分離，速度  

前言：層析法是目前廣泛應(yīng)用的一種分離技術(shù)。本世紀初俄*植物學家M.Tswett發(fā)現(xiàn)并使用這一技術(shù)證明了植物的葉子中不僅有葉綠素還含有其它色素?，F(xiàn)在層析法已成為生物化學、分子生物學及其它學科*域有效的分離分析工具之一。  

1.原理 

層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個相組成：一是固定相，它或者是固體物質(zhì)或者是固定于固體物質(zhì)上的成分；另一是流動相，即可以流動的物質(zhì)，如水和各種溶媒。當待分離的混合物隨溶媒（流動相）通過固定相時，由于各組份的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對比）不同，而且隨溶媒向前移動，各組份不斷地在兩相中進行再分配。與固定相相互作用力越弱的組份，隨流動相移動時受到的阻滯作用小，向前移動的速度快。反之，與固定相相互作用越強的組份，向前移動速度越慢。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組份，從而達到將各組份分離的目的。 

2.應(yīng)用與實踐： 

（一）凝膠層析法 

  凝膠層析又稱分子篩過濾、排阻層析等。它的突出優(yōu)點是層析所用的凝膠屬于惰性載體，不帶電荷，吸附力弱，操作條件比較溫和，可在相當廣的溫度范圍下進行，不需要有機溶劑，并且對分離成分理化性質(zhì)的保持有獨到之處。對于高分子物質(zhì)有很好的分離效果。 

（二）離子交換層析法 

  離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相，利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質(zhì)來分離離子型化合物的一種方法。 

（三）高效液相層析法 高效液相層析法（HPLC）是近二十年來發(fā)展起來的一項新穎快速的分離技術(shù)。它是在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上，引進了氣相層析的理論具有氣相層析的全部優(yōu)點。由于HPLC分離能力強、測定靈敏度高，可在室溫下進行，應(yīng)用范圍極廣，無論是極性還是非極性，小分子還是大分子，熱穩(wěn)定還是不穩(wěn)定的化合物均可用此法測定。對蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等尤為有利。 

高效液相層析法的基本概念和分離理論與經(jīng)典的液相色譜法及氣相色譜法一致，因而其塔板理論及動力學理論等都可用于高效液相層析。 （四）親和層析法 

親和層析是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。 

具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、DNA與互補DNA或RNA、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結(jié)合蛋白、糖蛋白與它相應(yīng)的植物凝集素等?？捎H和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑，當含有混合組份的樣品通過此固定相時，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，其它沒有親和力的無關(guān)組份就隨流動相流出，然后改變流動組成份，將結(jié)合的親和物洗脫下來。親和層析中所用的載體稱為基質(zhì)，與基質(zhì)共價連接的化合物稱配基。   親和層析純化過程簡單、迅速，且分離效率高。對分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質(zhì)尤為有效。但本法必須針對某一分離對象，制備專一的配基和尋求層析的穩(wěn)定條件，因此親和層析的應(yīng)用范圍受到了一定的限制。 

  親和層析可用于純化生物大分子：稀溶液的濃縮；不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏；從純化的分子中除去殘余的污染物；用免疫吸附劑吸附純化對此尚無互補配體的生物大分子；分離核酸是親和層析應(yīng)用的一個重要方面。 

 

（五）聚焦層析法 

  聚焦層析是一種操作簡單、廉價的層析技術(shù)。它的原理是根據(jù)各種蛋白質(zhì)的等電點不同進行分離的過程，因此本方法具有高分辨、高度濃縮和高度專一等特點。聚焦層析所用的凝膠shou先用高pH溶液平衡，然后用多元緩沖液進行洗脫，多元緩沖液pH呈梯度下降。