摘要：紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中各組分在；流動相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定相（濾紙纖維常能吸20%左右的水），有機溶劑如乙醇等為流動相，色素提取液為層析試樣。把試樣點在濾紙的濾液細線位置上，當(dāng)流動相溶劑在濾紙的毛細管的作用下，連續(xù)不斷地沿著濾紙前進通過濾液細線時，試樣中各組份便隨著流動相溶劑向前移動，并在流動相和固定相溶劑之間連續(xù)一次有一次的分配。結(jié)果分配比比較大的物質(zhì)移動速度較快，移動距離較遠；分配比較小的物質(zhì)移動較慢，移動距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上，從而達到分離。  

關(guān)鍵詞：紙層析，葉綠素，分離，速度  

前言：初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。葉綠體中有幾種色素。胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b隨層析液在濾紙上擴散速度不同，可以分出四條色素帶。  

材料和方法： （一）材料： 

用具：剪刀一把、干燥的定性濾紙、50ml的燒杯及100ml的燒杯各3個、白紙3張、試管架一個、研缽一個、玻璃漏斗一個、尼龍布或紗布、毛細血管一只、藥勺一個、10ml量筒一只，天平一只，試管3支、紙板一塊、棉塞3個、培養(yǎng)皿3個、刻度尺、注射器一只、蓋玻片    

試劑：丙酮、無水乙醇、層吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、二氧化硅、碳酸鈣、碳酸鈉    材料：新鮮的菠菜葉、青菜葉  

（二）方法和步驟： 

 1．提取綠色葉片中的色素 （1）取幾片綠色的葉片，去掉葉柄和主脈，用天平稱取 5g 葉片，剪碎，放 入研缽中。  

（2）向研缽中放入少許二氧化硅和碳酸鈣，進行充分的研磨。用量筒量取 5 ml 丙酮，倒入研缽中，迅速充分研磨。  

（3） 將研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中進行過濾。 將濾液收集到一個小試管中， 及時用棉塞將試管目塞緊。  

2．制備濾紙條 取一塊預(yù)先干燥處理過的定性濾紙，將濾紙剪成長 10 cm、寬 1cm 的濾紙 條，在距濾紙條一端 1cm 處用鉛筆畫一條細的橫線。  

3．畫濾液細線、 用毛細吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線均勻地畫出一條細而直的濾液細線。待 濾液于后，再畫 2~3 次。  

4．分離葉綠體中的色素 將 3 mL 層析液倒入燒杯中，將濾紙條（有濾液細線的一端朝下）略微料靠著 燒杯的內(nèi)壁，輕輕地插入到層析液中，隨后用培養(yǎng)皿蓋蓋上燒杯；（注意，不能讓濾紙上的濾液細線觸到層析液。紙層析法中所用的有機

溶劑如丙酮等，一般有揮發(fā)性、并有一定毒性，使用時要注意密封層析，避免吸入過多有害揮發(fā)物。）結(jié)果： 經(jīng)過10—15分鐘后，觀察分離后色素帶的分布。**上端橙黃色為胡蘿卜素，其次

黃色為葉黃素，再下面藍綠色為葉綠素a，**后的黃綠色為葉綠素b。  

討論與分析： 

分析：紙層析法依據(jù)極性相似相容原理，是以濾紙纖維的結(jié)合水為固定相，而以有機溶劑作為流動相。由于樣品中各物質(zhì)分配系數(shù)不同，因而擴散速度不同，從而達到分離的目的。一般用于葉綠體中色素的分離，葉綠體中色素主要包括胡蘿卜素、葉黃素、