柱層析技術(shù)
常說的過柱子應(yīng)該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相 的吸附柱。由于柱分的經(jīng)驗成分太多，所以下面我就幾年來過柱的體會寫些心得，希望
能有所幫助。
柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。
壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chǎn)品收集的時間，但是會減低柱子的塔板數(shù)。所
以其他條件相同的時候，常壓柱是效率**高的，但是時間也**長，比如天然化合物的分
離，一個柱子幾個月也是有的。
減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚**更多，但是由于大量的空氣通過
硅膠會使溶劑揮發(fā)（有時在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比較易分解的東西可能得
不到，而且還必須同時使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時間長）。以前曾經(jīng)大量的過
減壓柱，對它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動過減壓的念 頭了。
加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力
的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）。非凡是在輕易分解
的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會減低分離效果。個人覺得
加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的。 關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是粗長的**好。
柱子長了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪?
樣品層比較薄），這樣相對的減小了分離的難度。試想假如柱子十厘米，而樣品就有二
厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而假如樣品層只
有0.5厘米，那么各組分就比較輕易得到完全分離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多
的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對于產(chǎn)品來說也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說，
不過溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費(fèi)）。
現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1：5～10，書中寫硅膠量是樣品量的30～40倍，具體的選擇要具體分析。假如所需組分和雜質(zhì)分的比較開（是指在所需組分rf在0.2～0.4，雜質(zhì) 相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子
）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我覺得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的，也
可以減小淋洗劑的極性等等。
關(guān)于無水無氧柱，適用于對氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品。
可以濕柱，也可以干柱。不過在樣品之前**少要用溶劑把柱子飽和一次，因為溶劑和硅
膠飽和時放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，究竟要分離的是敏感的東東，小心不為過。也
是因為分離的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。**于是
加壓、常壓、減壓，隨需而定。因為是schlenk操作，所以點(diǎn)板是個問題，假如樣品是顯
色的，恭喜了，不用點(diǎn)板，直接看柱子上的色帶就行了。假如樣品無色，只好預(yù)備幾十
個schlenk瓶，一瓶一瓶的點(diǎn)，不過幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。像我以
前過一根無水無氧柱，需要六個schlenk，現(xiàn)在只一個就能把所要的全收集到。 無水無氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。因為硅膠中有大量的羥基裸露在外，
很輕易是樣品分解，非凡是金屬有機(jī)化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中
性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。
聽說有個方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一
照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒有驗證過。哪位做過可以提出來大家參詳參詳。 --
※ 關(guān)于濕法、干法上樣。
濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好
，不然溶劑就成了淋洗劑了。 很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會析出，這一
般都是比較大量的樣品才會出現(xiàn)，是因為硅膠對樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較
好的固體才會發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，假如不能重結(jié)晶
那就不管它了，直接過就是了，樣品隨著淋洗劑流動會溶解的。
有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF,DMSO等，會隨著溶劑一起走，
顯色是一個很長的脫尾），這時就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是1：
1，我覺得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣
品沒有吸附在硅膠上）。 溶劑的選擇。
當(dāng)然是**便宜，**安全，**環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫用 #p#分頁標(biāo)題#e#
正己烷的，太貴了，除非非凡需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過因
為極性很小，有時還是非它不可。乙醚也可以用，但是就是輕易睡覺，注重保持清醒別
讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸
附是一個放熱過程，所以夏天的時候經(jīng)常會在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時候會好一些
。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品假如想過元素分析的話要留神，應(yīng)該經(jīng)過后
繼處理，比如說重結(jié)晶等。其他的溶劑用的相對較少，要依個人的不同需要選擇了。
由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑
料桶裝的，就要注重這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色
的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴(yán)格的柱分時就要對溶劑重蒸。當(dāng)然過
原料時就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。 另外溶劑在過柱子后**好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)
是要消耗一定的人工。這里要注重的是，一般在過柱同時進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和
乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會導(dǎo)**性的變化，一般會使得極性變大，在梯度淋
洗時比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑**后回收要采用常壓，因為
在減壓旋蒸時會有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來，常壓時就會減少這種現(xiàn)象，假如雜質(zhì)和
你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了。 關(guān)于操作問題。
1 裝柱。
柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑，會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節(jié)門的。
干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別，只要能把柱子裝實就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊
密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會從一側(cè)斜著下來）。書中寫
的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就
全下來了。當(dāng)然假如你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是
開裂，甭管豎的還是橫的，都會影響分離效果，甚**作廢！
2 加樣。
用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降**石英砂面時，再
加少量的低極性溶劑，然后俅蚩釗绱肆餃危話閌⑸熬突臼前咨牧恕?
加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了）
，再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。
3 淋洗劑的選擇。
感覺上要使所需點(diǎn)在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開，過
柱子就用那種極性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不輕易在柱子上分開，因為柱子是一
個多次爬板的狀態(tài)，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3
）的三次方或四次方大。 4 樣品的收集。
用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡。所以假如樣品與硅膠的吸附比
較強(qiáng)的話，就不輕易流出。這樣就會發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時可以
采用氧化鋁作固定相。
另外，收集的試管大小要以樣品量而定，非凡是小量樣品，假如用大試管，可能一根就
收到了三個樣品，wuwu。假如都用小試管那工作量又太大。
5 **后的處理。
柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會累積到產(chǎn)品中，所以假如想送
分析，**好用少量的溶劑洗滌一下，因為大部分的雜質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒
了，必要時進(jìn)行重結(jié)晶。另外，再過柱的時候，有時會出現(xiàn)氣泡，一是
和使用的溶劑有關(guān)，假如是易揮發(fā)的溶劑，如乙醚、二氯甲烷等，在 室溫稍高的情況下，很輕易出現(xiàn)這種現(xiàn)象，因此，在室溫高的時候， 可以選擇沸點(diǎn)較高，揮發(fā)相對小的溶劑。還有，使用混合溶劑時，使用 的兩種溶劑的沸點(diǎn)應(yīng)該相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而
乙醚卻要選擇30－60的石油醚。二是：不論是用帶砂板的還是塞棉花的， 在裝柱之前，都要將空氣用加壓的方法將空氣排干，這樣就可避免柱中有 空氣！過柱子需要耐心，不要著急.
