柱層析
極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng) 極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)
極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)
拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
硅膠柱層析
下面介紹我現(xiàn)在慣用的方法：勻漿法。
1。稱量。200-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。
干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。
2。攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，
不能用氯仿體系過柱。
3。裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內，用石油
醚（氯仿）將其沖入柱中。 4。壓實。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直**流速恒定。柱床約被壓縮**9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應進行這一步，可使分離度提高很多，且可
以避免過柱時由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂。
5。上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉
塞**接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。 6。過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；1-2g上樣量，50g
硅膠（200-300目），20-50ml收一餾分。
7。檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一
般比噴顯劑底1-2個數(shù)量級。8。送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過一小
凝膠柱，作為送譜前的**后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。
1.先根據(jù)TLC方法篩選好洗脫劑，使兩相鄰物質Rf值之差**大化
2.將柱子必須裝平整、均勻 3.考慮有限柱填料的吸附量 4.可考慮用剃度法分開并洗脫
關于柱子的尺寸，應該是粗長的**好。
柱子長了，相應的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點就?。ǚ从吃谥由暇褪?樣品層比較薄），這樣相對的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二 厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只 有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到完全分離了。當然采用粗大的柱子要犧牲比較多 的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對于產(chǎn)品來說也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說，
不過溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費）。 現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1：5～10，書中寫硅膠量是樣品量的30～40倍，具體的選 擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開（是指在所需組分rf在0.2～0.4，雜質 相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子 ）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我覺得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的，也
可以減小淋洗劑的極性等等。
真空液相層析即vacuum liquid chromatography(VLC),即用真空代替壓力進行層析，具體方
法可見Synthesis,2001,**6,2431-,and J chem edu,1997,10,1222-
干法上樣，一般用于固體或粘度大的液體樣品。樣品用低沸點易溶溶劑溶解，加入1-3倍的粗硅膠，晾干或旋干，干燥的標準是硅膠成細粉而不粘在瓶壁上。裝好的柱子上留一段溶劑，把吸附了樣品的硅膠慢慢到進去，震動柱子或再加一些溶劑，把粘在柱壁上的硅膠洗下
常說的過柱子應該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相 的吸附柱。由于柱分的經(jīng)驗成分太多，所以下面我就幾年來過柱的體會寫些心得，希望
能有所幫助。
柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。
壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chǎn)品收集的時間，但是會減低柱子的塔板數(shù)。所 以其他條件相同的時候，常壓柱是效率**高的，但是時間也**長，比如天然化合物的分
離，一個柱子幾個月也是有的。
減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚**更多，但是由于大量的空氣通過 硅膠會使溶劑揮發(fā)（有時在柱子外面有水汽凝結），以及有些比較易分解的東西可能得 不到，而且還必須同時使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時間長）。以前曾經(jīng)大量的過 減壓柱，對它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動過減壓的念 #p#分頁標題#e#
頭了。
加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力 的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）。特別是在容易分解 的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會減低分離效果。個人覺得
加壓柱在普通的有機化合物的分離中是比較適用的。
關于無水無氧柱，適用于對氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品。
可以濕柱，也可以干柱。不過在樣品之前**少要用溶劑把柱子飽和一次，因為溶劑和硅 膠飽和時放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過。也 是因為分離的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。**于是 加壓、常壓、減壓，隨需而定。因為是schlenk操作，所以點板是個問題，如果樣品是顯 色的，恭喜了，不用點板，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無色，只好準備幾十 個schlenk瓶，一瓶一瓶的點，不過幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。像我以
前過一根無水無氧柱，需要六個schlenk，現(xiàn)在只一個就能把所要的全收集到。 無水無氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。因為硅膠中有大量的羥基裸露在外， 很容易是樣品分解，特別是金屬有機化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中
性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。 聽說有個方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一
照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒有驗證過。哪位做過可以提出來大家參詳參詳。
關于濕法、干法上樣。
濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好
，不然溶劑就成了淋洗劑了。
很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會析出，這一 般都是比較大量的樣品才會出現(xiàn)，是因為硅膠對樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較 好的固體才會發(fā)生，這就應該先重結晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結晶
那就不管它了，直接過就是了，樣品隨著淋洗劑流動會溶解的。 有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF,DMSO等，會隨著溶劑一起走， 顯色是一個很長的脫尾），這時就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是1： 1，我覺得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣
品沒有吸附在硅膠上）。
溶劑的選擇。
當然是**便宜，**安全，**環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻中有寫用 正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過因 為極性很小，有時還是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡覺，注意保持清醒別 讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸 附是一個放熱過程，所以夏天的時候經(jīng)常會在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時候會好一些 。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神，應該經(jīng)過后 繼處理，比如說重結晶等。其他的溶劑用的相對較少，要依個人的不同需要選擇了。 由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑 料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色 的雜質，其他的雜質就可想而知了，所以在比較嚴格的柱分時就要對溶劑重蒸。當然過
原料時就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。
另外溶劑在過柱子后**好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費，缺點 是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過柱同時進行的是減壓旋蒸，石油醚和 乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會導**性的變化，一般會使得極性變大，在梯度淋 洗時比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑**后回收要采用常壓，因為 在減壓旋蒸時會有部分低沸點的雜質一起出來，常壓時就會減少這種現(xiàn)象，如果雜質和
你下面要過的樣品有反應那就慘了。
關于操作問題。
1 裝柱。
柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑，會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節(jié)門的。 干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別，只要能把柱子裝實就行。裝完的柱子應該要適度的緊 密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會從一側斜著下來）。書中寫 的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就 全下來了。當然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習了。但是柱子更忌諱的是
開裂，甭管豎的還是橫的，都會影響分離效果，甚**作廢！
2 加樣。
用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降**石英砂面時，再 加少量的低極性溶劑，然后再打開活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。 加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了） #p#分頁標題#e#
，再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。
3 淋洗劑的選擇。
感覺上要使所需點在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開，過 柱子就用那種極性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開，因為柱子是一 個多次爬板的狀態(tài)，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3
）的三次方或四次方大。
4 樣品的收集。
用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比 較強的話，就不容易流出。這樣就會發(fā)生，后面的點先出，而前面的點后出。這時可以
采用氧化鋁作固定相。
另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就
收到了三個樣品，wuwu。如果都用小試管那工作量又太大。
5 **后的處理。
柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質也會累積到產(chǎn)品中，所以如果想送 分析，**好用少量的溶劑洗滌一下，因為大部分的雜質是溶在溶劑里的，一洗基本就沒
了，必要時進行重結晶。
實驗室常用的正向柱分離有加壓、常壓和減壓等，我原是做天然產(chǎn)物全合成的，也做過少量
天然產(chǎn)物分離工作。還常用到反向柱。
正向柱分離
1.TLC 1)加壓、常壓柱
主點Rf 0.5左右，相近的組份要能分開。
2)減壓柱
主點Rf 0.1左右，相近的組份要能分開，或次組份在原點。
2.硅膠或氧化鋁等 1)加壓、常壓柱 60到200目 2)減壓柱 300目以上
大空樹脂挺好，但自己用得少。硅藻土很多時侯也很好。
3.柱徑
好分、量大，柱徑可大些；難分、量小，柱徑可小些。
4.柱長
與柱徑相似，好分、量大，柱長可短些。
5.制樣
減壓一般是干法拌樣；加壓、常壓可干法拌樣，也可濕法備樣。
6.洗脫液
老板科研經(jīng)費多，用加壓、常壓耗溶劑太多；要想給老板省錢，給自己省時間，就用減壓。
7.接液
主點未出，多接；主點快出來及快出完，少接。
8.收率
對同一樣品且同量減壓一般收率低；加壓、常壓一般收率高。
9.備柱
無論減壓、加壓、常壓；無論干法、濕法備柱。填料要想法壓實，且備柱或過柱時均不可有
氣泡、斷層、干柱（減壓除外。），否則一切從頭開始。
